[目的]研究麻疯树甜菜碱醛脱氢酶(JcB01)的功能.[方法]通过RT-PcR和RACE的方法从麻疯树中克隆甜菜碱醛脱氢酶基因(JcBDl)的全长eDNA序列.将从麻疯树中克隆的IcBD1 eDNA与CaMV 35S组成型启动子融合,构建植物表达载体pBI-JB,利用根癌农杆菌介导转入烟草.对获得抗性的植株用PCR、RT-PCR及Western杂交检测分析,同时测定转基因烟草植株的电导率、JcBD1酶活性及抗盐性等特性.[结果]由JcBD1 eDNA序列推测的JcBD1氨基酸序列与已知的BADH具有很高的同源性,包括BADH家族绝对保守区域十肽"VSMELGGKSP"和半胱氨酸残基.这两部分区域在甜菜碱醛脱氢酶底物特异性结合过程中起着重要作用,与酶的催化活性有关. PCR及RT-PCR检测证明外源JcBDI已整合到烟草基因组中并成功表达,转化率为56.7%.转基因植株的电导率明显低于未转基因植株.盐胁迫处理后,在转基因植株的蛋白提取样中能检测到Western杂交信号,而在未转基因植株中没有检测到杂交信号;转基因植株的蛋白提取样中能检测到甜菜碱醛脱氢酶活性,而对照没有活性,表明JcBD1在转基因植株中得到了表达.转JcBOl烟草在盐胁迫下,生长势明显强于未转基因植株. [结论]JcBD1能在异源植物中正常翻译、表达;JcBD1是盐害胁迫相关的重要基因.

关键词: 麻疯树, 甜菜碱醛脱氢酶, 烟草, 转基因, 耐盐性, | 全部关键词