目的 克隆淡色库蚊细胞色素P450(CYP6F1)基因并进行表达差异的鉴定.方法 采用RT-PCR技术和RACE策略,从淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系4龄幼虫中克隆细胞色素P450基因(CYP6F1),用相应的软件进行生物信息学分析,并用实时定量PCR和RT-PCR分析敏感、抗性品系蚊的CYP6F1表达水平及对蚊各期CYP6F1进行表达鉴定.结果 成功克隆出CYP6F1基因,基因全长1 639 bp,开放阅读框为1 527 bp,编码508个氨基酸(GenBank登录号:AY662654).序列分析显示该基因与已克隆的日本致倦库蚊细胞色素P450基因(AB001324)有99%的同源性,并具有所有的细胞色素P450基因的保守性特征,1个膜锚定信号、2个还原酶结合位点、1个典型的血红素蛋白结合位点和ETLR基序等.实时定量PCR和半定量RT-PCR结果表明,CYP6F1在淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系中表达水平高于敏感品系,且CYP6F1基因在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达.结论 CYP6F1基因可能与杀虫剂抗药性相关,并且在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达.

关键词: 淡色库蚊, 抗药性, 细胞色素P450, RT-PCR, 基因克隆, | 全部关键词