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以马铃薯ND2 mRNA为内对照双重RT-PCR法检测马铃薯纺锤块茎类病毒Duplex RT-PCR Detection of Potato spindle tuber viroid with an Internal Control of Potato ND2 mRNA |
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<<园艺学报>>2007年 第34卷 第05期
作者: 马恢, 谢晓亮, 尹江, 温春秀, 吴志明,
期刊-核心期刊 ISSN : 0513-353X(2007)05-1213-04
根据马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)基因序列设计特异引物,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术进行PSTVd检测研究.为避免由于提取的RNA降解或者RT-PCR反应质量不高所造成的假阴性问题,在检测过程中引入马铃薯线粒体NADH脱氢酶ND2亚基基因mRNA为内对照,该内对照的一个引物跨越了该基因内含子区域,只对剪接后的mRNA进行特异扩增而不扩增其本身DNA.利用内对照引物和PSTVd特异引物进行双重RT-PCR检测,分别扩增出190 bp的内对照基因特异片段和360 bp的PSTVd特异条带,与预期引物设计大小一致.引入的内对照可以较好地监控PSTVd的RT-PCR检测过程.