本发明涉及一种同型半胱氨酸诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定同型半胱氨酸浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒主要成分包括：缓冲液、丝氨酸、α-酮戊二酸、胱硫醚β合酶、γ-胱硫醚酶、半胱氨酸脱巯基酶、羟丁酸脱氢酶、谷氨酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、还原型辅酶及稳定剂；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶(偶)促反应，再将反应物置于紫外/可见光分析仪下，检测主波长340nm处吸光度下降的速度大小，从而测算出同型半胱氨酸的浓度。采用本发明完全可以通过紫外/可见光分析仪器得出所需的测定结果，并且灵敏度高、精确度好，不受内外源物质的污染，便于推广应用。